Controllo qualità
Transglutaminasi
Definizione
La transglutaminasi comprende enzimi che catalizzano la reazione di trasferimento acile in cui il gruppo Y-carboxaminde di residui di glutammina in proteine e peptidi agisce come donatore acile, e il gruppo amminico primario nei composti amminici o il gruppo ξ-amminico di residui di lisina in proteine o peptidi agisce come recettore acile. È derivato dal fegato di animali o dalla coltura di attinomiceti (limitati a S treptoverticillium mobariense e specie del genere S treptomyces ) o batteri (limitati a specie del genere Bacillus ). Può contenere alimenti utilizzati esclusivamente per ammassare, polverizzare, diluire, stabilizzare, conservare o regolare la sua attività. Può anche contenere additivi alimentari utilizzati per ammassare, polverizzare, diluire, stabilizzare o conservare o per regolare il suo pH o attività.
Descrizione
La transglutaminasi si presenta come granuli, polvere o pasta da bianco a marrone scuro, o come liquido da incolore a marrone scuro. È inodore o ha un odore caratteristico.
Identificazione
La transglutaminasi è conforme al test di attività della transglutaminasi.
Purezza
(1) Piombo Non più di 5 μg/g come Pb (0,80 g, metodo 1, soluzione di controllo: soluzione standard di piombo 4,0 ml, metodo fiamma).
S e il residuo non si dissolve in 5 mL di acido nitrico diluito (1 su 100) nella preparazione della soluzione di prova, effettuare la prova utilizzando il metodo 3.
(2) Arsenico Non più di 3 μg/g come As (0,50 g, metodo 5, colore standard: soluzione standard Arsenico 3,0 ml, apparecchio B).
Limiti microbici
Procedere come indicato ai test limite microbici.
C onteggio totale delle lastre: non più di 50.000 per grammo.
Escherichia coli : Negativo per.
S almonella : Negativo per.
Fluido del campione Preparare come indicato nel Metodo 3 per il conteggio totale delle lastre.
Pre-arricchimento C coltura Preparare come indicato nel metodo 3 per il test Escherichia coli e nel metodo 2 per il test S almonella .
Test di attività della transglutaminasi
Eseguire il test utilizzando il metodo indicato di seguito. S e la prova di identificazione non può essere eseguita con il metodo indicato, è accettabile sostituire adeguatamente il fattore di diluizione del campione, la soluzione tampone e la temperatura per la reazione qualora ciò sia scientificamente giustificato.
S oluzione del campione Pesare 0,10 g di Transglutaminasi, aggiungere Tris buffer (0,2 ml/L) a pH6. S e necessario, preparare una diluizione 10 volte o 100 volte aggiungendo lo stesso tampone (0,2 ml/L, pH6.0) alla soluzione risultante.
S oluzione di substrato Pesare 4,048g di benzilossicarbonil-L-glutaminilglicina, 2,780g di cloruro di idrossilammonio, 1,229 g di glutatione (forma ridotta), 0,295g di cloruro di calcio disidratato e 9,688 g di 2-ammino-2-idrossimetil-1,3-propandione, e dissolverli in acqua, quindi regolare il pH di questa soluzione a 6,0 e fare 400mL.
S oluzione di prova Equilibrare 0,2 ml della soluzione del campione a 37℃ per 1 minuto, aggiungere 2 ml della soluzione del substrato, equilibrato a 37℃ per 10 minuti e agitare bene immediatamente. Incubare la miscela a 37℃ per 10 minuti. Aggiungere 2 mL di ferro (III) cloruro (per il test di attività della transglutaminasi) e agitare bene immediatamente. C entrifugare questa soluzione a 3000 giri/min e utilizzare il surnatante come soluzione di prova.
C ontrollo S S olution Equilibrare 2 mL della soluzione del substrato a 37℃ per 10 minuti, aggiungere 2 mL di ferro (III) cloruro (per il test di attività della transglutaminasi) e agitare bene immediatamente. Poi aggiungere 0,2 ml della soluzione del campione, agitare bene e centrifugare questa soluzione. Usa il supernatante come soluzione di controllo.
Procedura Misurare l'assorbanza della soluzione di prova e della soluzione di controllo ad una lunghezza d'onda di 525 nm. Il valore di assorbimento della soluzione di prova è superiore a quello della soluzione di controllo.
